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| Kits pour la MicroGénomique |
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Directement à la PCR |
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Le kit PicoPure™ DNA permet une extraction simple et rapide de l'ADN génomique prêt à l'utilisation en PCR. Extraire et amplifier l'ADN dans le même tube, sans phase d'extraction organique ou de centrifugation sur colonne. Récupérer l'ADN à partir de quelques cellules obtenues par Microdissection Laser ou de quelques milligrammes de tissu.
Le kit d'extraction PicoPure™ DNA contient de la proteinase K stabilisée, un tampon de reconstitution compatible avec les techniques de PCR, et un mode d'emploi complet. Dans ce kit, chaque aliquot de proteinase K peut être reconstitué fraîchement pour faire 150µl de solution d'extraction, soit 150 x 10µl en utilisant les CapSure™ HS ou 30 x 50µl en utilisant les Macro CapSure.
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Extraction et amplification reproductibles d'ADN de gènes simple-copie à partir de 10 cellules capturées par LCM. Cellules microdisséquées à partir de cytospin de cellules blanches de sang périphérique humain. Extraction avec 10 µL de PicoPure DNA. Analyse après 35 cycles de PCR à l'aide de 3 sets de primers. M: DNA Marker (Sigma). Couloirs 1-5: 536 bp fragment du gène de la Béta-globine humaine. Couloirs 6-10: 245 bp fragment de gène de la mucoviscidose (CFTR). Couloirs 11-15: 125 bp fragment du gène de la p53. Couloir 16: pas de template, contrôle négatif PCR. |
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Augmenter le rendement en ADN |
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Comme l'ADN n'est pas perdu lors d'une éventuelle phase d'extraction organique ou de centrifugation sur colonne, le kit PicoPure DNA permet un rendement en ADN fiable et reproductible à partir de quelques cellules.
Des études en PCR illustrent les avantages du kit PicoPure DNA. Une quantité équivalente d'ADN a été transférée dans un tube pour PCR, à partir d'extractions faites avec PicoPure DNA, et avec un kit d'un fabricant leader de ce marché. Une PCR quantitative en temps réelle (QRT-PCR) montre que les échantillons traités par PicoPure DNA s'amplifient plus vite, suggérant plus de quantité d'ADN de départ, avec une amplification plus fidèle, indiquant moins de variations dans les échantillons, qu'avec une technique classique sur colonne.
Le kit PicoPure DNA permet une récupération fiable de l'ADN qui augmente le sensibilité de détection, par exemple, lors de l'amplification d'un gène en simple copie dans une analyse de mutations ou lors d'analyses en génotypage. Ce haut rendement en ADN fait de ce kit, le produit idéal en utilisation à partir de petits échantillons microdisséqués,, telles ceux préparés par LCM.
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Récupération supérieure d'ADN à l'aide de PicoPure DNA. 1 ng d'ADN a été dilué dans 10 µL de PicoPure DNA, 5 réplicats. La même opération est réalisée avec d'autres kits du commerce. Un fragment du gène de la béta-globine humaine est ensuite amplifié par RT-PCR, 40 cycles. |
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Extraire de l'ADN pour toutes les applications en PCR |
| L'ADN extrait avec le kit PicoPure DNA est compatible avec une utilisation en PCR dans le même tube de 0,5ml utilisé pour l'extraction. Pour déterminer le nombre de copies d'un gène, l'ADN de très petits échantillons peut êtres amplifié directement par QRT-PCR sans aucune étape de purification préalable, en utilisant une plateforme comme le LightCycler® (Roche) . Pour des analyses de mutations ou de génotypage très particulières, l'ADN peut être extrait à partir de très petits échantillons et directement amplifié, et les fragments peuvent êtres séparés par dHPLC (denaturing High-Performance Liquid Chromatography), en utilisant un système WAVE® (Transgenomics). |
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Extraction par PicoPure DNA et quantification du nombre de copies de Her2neuRT-PCR. 10, 100, et 1000 cellules SKBR3 ont été microdisséquées à partir d'étalement cellulaire par LCM. L'ADN est extrait par 10 µL de PicoPure DNA et 10 µL sont dilués avec 20 µL de solution pour LightCycler® et amplifiés sans autre purification. Le nombre de copies de gène par échantillon est déterminé et divisé par le nombre de cellules pour avoir le nombre de copies par cellule. |
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L'extraction PicoPure DNA est compatible avec la PCR en point final et la détection d'amplicons par dHPLC. L'ADN est extrait de 10 cellules blanches de sang périphérique humain à l'aide de PicoPure DNA. L'ADN est directement utilisé sans autre purification pour amplifier par PCR un fragment de 125 pb du gène humain de la p53 et un fragment de 245 pv du gène humain de CFTR. Le produit PCR est analysé par dHPLC WAVE® System.
Data courtesy of Scott Hamlin and Nicolas Neckelmann, Transgenomics, Inc., San Diego, CA.
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Utilisé avec la plupart des tissus et préparations cellulaires |
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Le kit d'extraction PicoPure DNA permet de récupérer avec succès l'ADN génomique à partir de coupes de tissus animal et de la plupart des préparations cellulaires*. De très bons résultats sont obtenus à partir de coupes en paraffines fixation au formol, de coupes de tissus congelés, de cellules fixées à l'éthanol, et de frottis cellulaires.
*N'est pas recommandé pour utilisation sur sang total, plantes et champignons.
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| PicoPure DNA extraction and ?-globin gene amplification from LCM samples prepared by various methods. Cell and tissue samples were prepared for LCM using the methods listed below. LCM was used to collect samples. DNA was extracted using the PicoPure DNA Extraction Kit, a single-copy 536 bp human ?-globin fragment was amplified from each sample using standard protocols, and the products were electrophoresed on a 10% polyacrlamide/TBE gel and stained with SYBR® Gold Nucleic Acid Stain (Molecular Probes). M: DNA marker. Lanes 1-3: ethanol-fixed SKBR3 cells. Lanes 4-6: formalin-fixed, paraffin-embedded breast tissue. Lanes 7-9: frozen, ethanol-fixed foreskin tissue. Lane 10: positive PCR control of 1 ng human genomic DNA template. Lane 11: negative control, no PCR template. |
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Pour usage laboratoire uniquement.
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