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| RCL2®, Fixateur histologique sans formol |
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| RCL2®, la véritable alternative au formol pour un meilleur service au Patient |
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La fixation des tissus fait classiquement appel depuis des décennies à des produits à base de formaldéhyde tel que le formol ou l'AFA (alcool+formol+acide acétique). Le formaldéhyde présente la caractéristique de former des liaisons covalentes entre les différentes molécules biologiques, les stabilisant ainsi et inhibant les activités enzymatiques.
Bien que d'utilisation massive dans les laboratoires de pathologie et d'histologie humaine ou animale, le formol et ses variantes présentent deux inconvénients majeurs bien connus depuis longtemps :
(1) Le formaldéhyde est un produit hautement toxique. Classé cancérogène de classe I depuis octobre 2006 par l'OMS, il est démontré à l'origine avérée de pathologies respiratoires, d'allergies, et de cancers des voies respiratoires. |
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(2) L'action pontante du formaldéhyde rend l'extraction des ADNs, des ARNs et des protéines difficiles voire impossibles en quantité et qualité suffisantes pour la mise en œuvre de tests prédictifs de réponse à de nouvelle thérapeutique ciblée ou pour la recherche moléculaire qui requiert des molécules de très grande qualité et en quantité.
Développé depuis 1999 par la Dr Philippe ROCHAIX, anatomo-pathologiste au Département d'Anatomie Pathologique du Professeur VOIGT, Centre de Lutte Contre le Cancer Claudius Regaud, Toulouse, France, le RCL2® est un nouveau fixateur véritablement innovant des tissus, préservant les structures tissulaires et cellulaires. |
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| Rendre toutes les pièces accessibles à la recherche et au diagnostic moléculaire pour un meilleur service rendu au Patient grâce au RCL2® |
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La fixation des spécimens au formol constitue un frein important à la recherche et au développement des méthodes moléculaires de profilage des patients dans la définition des thérapies ciblées.
RCL2® fixe les tissus en préservant les composantes histologiques et moléculaires à un haut niveau de qualité et de contenu.
En changeant pour le RCL2®, vous facilitez l'accès du Patient aux méthodes thérapeutiques les plus modernes, ciblées, et efficaces, pour mieux soigner sans altérer inutilement la qualité de vie des Patients tout en préservant l'économie de Santé. |
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Adoptez le RCL2® et faites passer votre laboratoire dans l'ère de l'histo-pathologie moléculaire. Changer pour un meilleur service au Patient.
ALPHELYS vous apportera tout le support technique nécessaire dans l'optimisation de vos protocoles pour vous rendre la transition plus simple et rapide. |
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| RCL2® permet de combiner techniques histologiques et moléculaires sur les mêmes spécimens pour une meilleure efficacité de la Recherche |
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L'utilisation du formol dans la fixation des tissus pour le diagnostic et les techniques histologiques contraint les laboratoires à congeler une partie des prélèvements pour la recherche moléculaire (voir ci-dessous).
De ce fait, les techniques de biologie moléculaire, effectués sur les prélèvements congelés, seront réalisées sur des tissus différents de ceux sur lesquels le diagnostic a été formé et où toutes les analyses histologiques (IHC, FISH…) ont été réalisées.
La plupart des tissuthèques et tumorothèques recule devant le contrôle qualité histologique systématique de tous les fragments congelés qui requiert de trop importantes ressources.
L'utilisation du RCL2® permet au chercheur de travailler exactement sur les mêmes pièces que celles sur lesquelles a été formé le diagnostic histopathologique et permet d'améliorer l'efficacité et la précision de la Recherche. Le RCL2® est le seul fixateur qui produit des spécimens hautement compatibles avec la biologie moléculaire après une fixation classique à température ambiante, sans changer vos procédures. |
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RCL2® rend les tissuthèques et tumorothèques possibles pour tous les laboratoires
Les dégradations occasionnées par la fixation au formol sur les tissus contraignent les laboratoires à congeler une fraction des spécimens et à les conserver à très basse température dans des environnements coûteux à l'investissement et à l'entretien.
Les propriétés exceptionnelles de fixation du RCL2® vous permettent d'éviter la congélation.
En une seule procédure de fixation selon un protocole très classique, vous fixez des tissus qui pourront être utilisés à la fois pour le diagnostic mais aussi pour la recherche moléculaire et les techniques d'évaluation d'éligibilité aux nouvelles thérapies ciblées.
L'utilisation du RCL2® vous permet de simplifier vos procédures de laboratoire et de réduire vos dépenses.
Les spécimens collectés dans le secteur privé et qui constituent une part importante du recrutement national peuvent être fixés sans surcoût par RCL2® et deviennent alors compatibles pour la Recherche sans investissement.
Les tissus fixés au RCL2® peuvent être conservés à température ambiante voire à -20°C lorsqu'une très haute qualité moléculaire est requise. De ce fait, les budgets requis pour le stockage sont évidemment bien moindres. L'exploitation est sans risque et utilise des équipements classiques, d'entretien bien moins coûteux.
Sans changer vos méthodes de travail, l'utilisation du RCL2® dans la fixation de vos spécimens est une source de simplification des méthodes de travail, d'économie importante et d'accessibilité pour plus de spécimens pour la Recherche. |
| RCL2®, le seul fixateur histologique véritablement non toxique pour la Santé et l'Environnement |
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Les composants du RCL2® ,dont la recette est protégée par un brevet délivré, sont réputés et démontrés sans dangers pour la Santé humaine et l'Environnement depuis des décennies au regard des règlementations européennes ou américaines et sont mêmes autorisés pour l'alimentation humaine.
Le fixateur RCL2® n'a de ce fait aucun risque d'être un jour classé dangereux contrairement à nombres d'autres fixateurs sans formol qui pourront vous être proposés mais qui contiennent des dialdéhydes, molécule d'activité similaire au formaldéhyde et pouvant présenter des risques pour la santé.
L'utilisation du RCL2® préserve votre personnel et l'activité de votre laboratoire en éliminant le risque pathogène et cancérogène du formol.
Etes-vous prêt à investir des efforts pour changer de fixateur en prenant le risque que celui-ci soit classifié dangereux dans un avenir proche et qu'une nouvelle réglementation vous oblige à changer à nouveau ? Faites le vrai choix, pas un compromis, adoptez RCL2®.
Télécharger la fiche de sécurité ici. (Formulaire de demande). |
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Faites des économies budgétaires avec le fixateur histologique RCL2®
Vous trouvez que les nouveaux fixateurs pour remplacer le formol sont plus chers que ce dernier ?
Faites votre bilan de coût de revient de manière globale.
L'adoption de postes de travail adaptés pour réduire la contamination aérienne de votre laboratoire coûte cher. Vous devez assurer une surveillance régulière de votre environnement afin d'éviter la contamination de votre personnel ou le risque d'un arrêt temporaire d'activité si un contrôle de la Médecine du Travail vous met en défaut.
La gestion des déchets, leur collecte et le traitement par les services d'une société spécialisée sont également coûteux et engagent votre responsabilité.
Faites votre bilan de manière plus globale et vous constaterez que le fixateur RCL2® vous permet de faire des économies de budget significatives tout en garantissant la sécurité et la simplicité d'utilisation pour vous-même, vos collaborateurs et votre Environnement.
Achetez-vous de la sérénité avec le RCL2®. |
| RCL2® EN IMAGES |
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| + RCL2® & la Morphologie |
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RCL2® préserve la morphologie des tissus et des cellules.
La coloration en H&E présente une morphologie et des couleurs similaires à celles d'une coupe fixée au formol.
La morphologie est préservée après plusieurs années de conservation à température ambiante comme l'ont montré les essais.
Contrairement au formol qui a une action chimique progressive et qui continue bien après la fixation lors du stockage du spécimen, RCL2® a une action immédiate et complète dès le contact avec le tissu. Il n'y a pas de dégradations des tissus par le fait d'une fixation prolongée. RCL2® facilite ainsi la gestion des fixations des spécimens arrivant tardivement en fin de journée voire en fin de semaine.
RCL2® produit une dureté agréable pour la découpe en macroscopie et ne dilue pas l'encre de Chine que vous pouvez utiliser pour marquer les limites de résection. |
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Coupe d'un prélèvement de cancer du sein fixé en RCL2®, colorée en H&E. |
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| + RCL2® & Immuno-Histochimie |
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RCL2® préserve le contenu antigénique. De nombreux antigènes ont été testés avec succès comme en témoigne la liste ci-dessous.
Sur nombre d'antigènes, l'intensité de signal obtenue peut être nettement supérieure à celle obtenue en formol autorisant à une dilution de l'anticorps et donc des économies. Il peut également s'avérer que les antigènes ne nécessitent pas de démasquage, simplifiant encore le travail et apportant des économies supplémentaires.
Comme dans le cas de tous les fixateurs, il n'est pas anormal d'avoir à réaliser une légère mise au point de vos protocoles et en particulier un calibrage pour vos scorings.
ALPHELYS vous apportera tout le support technique requis pour vous permettre de réduire au mieux la période de transition vers RCL2®. |
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Immunomarquage TTF1 clone SPT24 sur tissu fixé en RCL2®, objectif 10X. |
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Immunomarquage Her2neu sur tissu fixé en RCL2®, objectif 10X. |
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Immunomarquage CD 30 sur Hodgkin's fixé en RCL2® et sans démasquage, objectif 40X. |
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- Liste des antigènes validés sur tissu fixé en RCL2® -
| Antigène |
Clone |
Antigène |
Clone |
| ACE |
polyclonal |
Epithelial Membrane Antigen |
E29 |
| Actine |
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Estrogen receptor |
6F11 |
| B cell |
DBB42 |
Galectine 3 |
9C4 |
| BCL2 |
124 |
GFAP |
polyclonal |
| Calcitonine |
polyclonal |
Hairy cell |
DBA44 |
| CD3 |
F7.2.38 |
HER2 |
DA0485 |
| CD5 |
DK23 |
HMB45 |
HMB45 |
| CD15 |
80H5 |
Ki67 |
MIB1 |
| CD20 |
L26 |
Kerzin 3 |
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| CD23 |
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Kerzin 5 |
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| CD30 |
BerH2 |
Mammaglobine |
304-1A5 |
| CD31 |
JC/70A |
MDM2 |
MDM2 |
| CD34 |
QBEND10 |
Melan A |
A103 |
| CD45 |
2B11 PD7/26 |
Mic-2 |
1,20E+08 |
| CD57 |
NC1 |
Myogenine |
F5D |
| CD68 |
KP1 |
Neurofilament |
2F11 |
| CD68 |
PGM1 |
NSE |
BBS |
| CD 79 |
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PNL2 |
PNL2 |
| CD 138 |
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Progesteron receptor |
PgR636 |
| CD 791 |
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Protein S100 |
DAKO |
| CDK4 |
DSC-31 |
P16 |
E6H4 |
| Cycline D1 |
SP4 |
P21waf |
SX118 |
| Chromogranine |
DAK-A3 |
P27 |
SX53G8 |
| C-Kit |
CD117 DAKO |
P53 |
DO-7 |
| Collagen IV |
CIV22 |
Smooth muscle actin |
1A4 |
| Cytokeratines |
AE1/AE3 |
Smooth muscle actin |
HHF35 |
| Cytokeratines |
KL1 |
Thyroglobulin |
DAKO |
| Cytokeratine 5/6 |
D5/16B4 |
TTF-1 |
SPT24 |
| Cytokeratine 7 |
OVTL12/30 |
Vimentin |
V9 |
| Cytokeratine 8/18 |
CK8/18 |
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| Cytokeratine 19 |
RCK108 |
| Cytokeratine 20 |
K20.8 |
| D2 40 |
D2 40 |
| Desmine |
D33 |
| EGFR |
Kit DAKO |
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| + RCL2® & Hybridation In Situ |
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| D'excellents résultats en CISH et FISH sont obtenus sur des tissus fixés au RCL2®. Les expressions sont élevées, les signaux sont spécifiques et le bruit de fond reste faible. |
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FISH Her2neu sur tissu fixé en RCL2® objectif 40X. |
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CISH Her2neu sur tissu fixé en RCL2® objectif 40X. |
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| + RCL2® & ADN |
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| Un tissu fixé au RCL2® autorise une extraction d'ADN en grande quantité et de qualité. Les ADNs sont de haut poids moléculaire et permettent la réalisation d'une PCR également de grande taille. Les produits PCR peuvent être séquencés sans difficultés. |
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ADN génomique
Couloir 1 : RCL2®
Couloir 2 : Congelé
Couloir 3 : Marqueur Lambda 20,000 bp max |
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PCR sur 2,4 kpb
Gène BRCA-1
T- Contrôle négatif
R1 Tissu fixé au RCL2®
F1 Congelé
R2 Tissu fixé au RCL2®
F2 Congelé
Lambda marqueur |
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| + RCL2® & ARN |
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RCL2® rend possible des rendements d'extraction proches de ceux obtenus en congélation soit environ 100 fois supérieurs à ceux obtenus à partir de tissu fixé au formol dans des conditions classiques de fixation et d'inclusion en paraffine avec une bonne qualité de vos ARN.
Vous pouvez obtenir des ARN de qualité et de quantité encore supérieures si vous réunissez les conditions optimales de préservation des ARN à savoir : réduction du délai entre prélèvement et fixation (max 15'), fixation au RCL2® à +4°C, inclusion en paraffine à température réduite et durée de bains limitée et conservation à +20°C. |
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Tissu congelé |
Tissu fixé à +4°C par RCL2® |
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| + RCL2® & Protéines |
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| Un rendement d'extraction de protéines 1000 fois supérieur à celui obtenu en tissu fixé au formol est rendu possible sur tissu fixé en RCL2® et inclus en paraffine. C'est un rendement équivalent à celui obtenu à partir d'un prélèvement congelé. Les profils protéiques en gel d'acrylamide, en 1D ou 2D et Western Blot sont similaires à ceux obtenus à partir de prélèvements congelés. Les profils SELDI-TOF sont également semblables. |
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Gel SDS-PAGE
Protéines extraites en tampon Tris 10 mM, SDS 2%, 95°C
Couloir 1 : Marqueur
Couloir 2 : Tissu fixé en RCL2®
Couloir 3 : Tissu congelé
Couloir 4 : Tissu fixé au formol |
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Gel SDS-PAGE
Protéines de différents gènes extraites en tampon Tris 10 mM, SDS 2%, 95°C
Couloir 1 : Tissu congelé
Couloir 2 : Tissu fixé en RCL2® |
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Profil SELDI-TOF
En haut : Tissu congelé
En bas : Tissu fixé au RCL2® |
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| + RCL2® & Stabilité |
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| Des tests de stabilité ont été réalisés sur des spécimens fixés au RCL2®. L'observation de spécimens fixés au RCL2® et conservés à température durant plus de 6 ans ne démontre aucun évolution des caractéristiques morphologiques. |
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A : Ganglion lymphoïde fixé par RCL2® : morphologie cellulaire semblable à celle obtenue classiquement avec les fixateurs formolés.
B : Thyroïde fixée en décembre 1999, coupée et colorée en janvier 2007 : excellente préservation morphologique.
C : Immunomarquage du CD 20 réalisé sur ganglion fixé en décembre 1999, coupé et colorée en janvier 2007 : excellente préservation antigénique.
D : Immunomarquage du CD 3 réalisé sur ganglion fixé en décembre 1999, coupé et colorée en janvier 2007 : excellente préservation antigénique. |
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| + RCL2® : Pas de changement dans la méthode |
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Le RCL2® se substitue au fixateur formolé habituel sans changement des techniques normales de traitement des tissus.
Le temps de fixation est similaire au formol que ce soit à température ambiante ou à +4°C et vous pouvez même gagner en flexibilité car la fixation prolongée des pièces dans le RCL2® n'apporte pas de dégradations des tissus contrairement au formol.
La fixation des biopsies peut être pratiquée dans la plupart des automates de déshydratation et d'inclusion.
Les spécimens fixés au RCL2® et avec des produits formolés peuvent être mélangés dans l'automate. |
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| + RCL2® : Protection de vos ARNs durant la microdissection laser |
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La récupération d'ARNS de grande qualité et en quantité à partir de coupes congelées requiert des précautions importantes. En effet, dès lors la coupe déposée sur la lame, la dégradation des ARNs commence rapidement par la réactivation des RNAses en présence d'eau.
Il est possible d'utiliser un inhibiteur de protéines mais la morphologie est généralement fortement dégradée et complique sévèrement la reconnaissance des structures, étape essentielle dans le ciblage lors de la microdissection laser.
L'équipe de l'INRA de Jouy-en-Josas (78) a démontré que le dépôt d'une goutte de RCL2® sur une coupe congelée au moment de la dépose sur lame permet de protéger les ARNs pendant toute la durée de la microdissection laser et même au-delà à température ambiante avec l'atout essentiel de la préservation de la morphologie. |
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| Coupe congelée |
Coupe congelée avec inhibiteur de protéines |
Coupe congelée protégée par RCL2® |
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Une véritable alternative à la fixation au formol est désormais disponible et validée.
Le RCL2® apporte de nombreux bénéfices tant pour la Recherche, pour l'économie de Santé, pour l'Environnement que pour le Service au Patient.
Contactez-nous pour tester le RCL2® et faites passer votre laboratoire dans l'ère de l'histopathologie moléculaire. |
Publications
1. DELFOUR C, ROGER P, BRET C, BERTHE ML, ROCHAIX P, KALFA N, RAYNAUD P, BIBEAU F, MAUDELONDE T, BOULLE N. RCL2, a new fixative, preserves morphology and nucleic acid integrity in paraffin-embedded breast carcinoma and microdissected breast tumor cells. J Mol Diagn. 2006;8:157-69.
2. LACROIX-TRIKI M, LAMANT L, ALLAL CUIDER B, DECHA A, VOIGT J-J, ROCHAIX P. RCL2® a new non toxic fixative allowing extraction of high quality DNA, mRNA and proteins from paraffin embedded tissues.
3. Bellet V, Boissière F, Bibeau F, Desmetz C, Berthe M, Rochaix P, Maudelonde T, Mangé A, Solassol J., Proteomic analysis of RCL2 paraffin-embedded tissues , J Cell Mol Med . 2007 Dec 10.
4. V. Bellet, P. Rochaix, A. Mange, J. Solassol , Étude d'un nouveau fixateur pour l'analyse du protéome tissulaire, Study of a new tissue fixative for tissue proteom analysis, Ann Biol Clin 2008; 66 (4): 401-7
5. Belief V, Boissière F, Bibeau F, Desmetz C, Berthe ML, Rochaix P, Maudelonde T, Mangè A, Solassol J., Proteomic analysis of RCL2 paraffin-embedded tissues, J Cell Mol Med . 2008 Oct;12(5B):2027-36.
6. Sophie Le Guellec, Magali Lacroix-Triki, Jean-Pierre Delord, Cuider Ben Allal, Philippe Rochaix , Les nouveaux fixateurs tissulaires, New Tissue Fixative, RFL - Revue francophone des laboratoires, Vol 38, N° 408 - janvier 2009, pp. 25-32. |
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Remerciements chaleureux à
Le Dr Philippe ROCHAIX, Institut Claudius Regaud, Toulouse, France, pour son action essentielle dans l'invention de ce fixateur génial.
L'Institut Claudius Regaud et tout particulièrement la Direction Générale d'avoir bien voulu faire confiance à ALPHELYS pour développer et commercialiser ce produit.
Mme Claudia BEVILACQUA, Unité de Génomique Fonctionnelle & Physiologique de la Lactation, INRA, Jouy-en-Josas, France pour ses travaux et et pour avoir bien voulu nous autoriser l'utilisation de ses images et résultats.
Dr Nathalie BOULLE, Unité INSERM U540, Hôpital Arnaud de Villeneuve, Montpellier, France pour ses travaux et pour avoir bien voulu nous autoriser l'utilisation de ses images et résultats. |
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ALPHELYS,
Ferme des Ebisoires, Impasse Paul Langevin, 78370 Plaisir - France
Tél +33 (0)1 30 07 52 95 - Fax +33 (0)1 30 07 51 56 - eMail
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